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L’imagerie numérique est de plus en plus appliquée à la capture d’images pour la microscopie – un domaine qui exige une haute résolution, une fidélité des couleurs et une gestion minutieuse des conditions de lumière, souvent limitées. Ce sont des exigences difficiles, même pour la photographie traditionnelle sur film, alors pourquoi envisager l’imagerie numérique ? Cet article aborde la façon dont l’imagerie numérique se comporte dans ces conditions et quels sont les avantages de l’imagerie numérique pour le microscopiste optique.

La figure 1 illustre une image numérique d’une section épaisse d’intestin de souris colorée avec trois fluorophores et enregistrée avec un système de caméra numérique Nikon DXM1200 couplé au stéréomicroscope SMZ1500. L’image a été capturée en utilisant une combinaison de techniques d’illumination par fluorescence et par contraste cohérent oblique (OCC), propriété de Nikon. Un total de quatre intégrations a été effectué et l’image a été composée dans Photoshop pour donner la version finale présentée dans la figure.

Pourquoi envisager l’imagerie numérique ?

Il est important de souligner que la qualité de l’image finale, qu’elle soit numérique ou sur film, dépend de la qualité de l’image microscopique originale. Quelle que soit la qualité de l’appareil photo numérique ou conventionnel, il ne peut pas produire des images exceptionnelles à partir d’un microscope mal configuré. En outre, les systèmes d’imagerie sur film et numérique peuvent révéler des imperfections qui ne sont pas immédiatement visibles lorsqu’on regarde à travers l’oculaire du microscope.

Avec le développement général des communications électroniques, il existe un réel besoin d’images numériques, qui peuvent être facilement transmises à un grand nombre d’utilisateurs. Les images numériques, par exemple, peuvent être simplement envoyées par courriel à des fins de consultation et de discussion, incorporées dans d’autres documents numériques, exportées vers des systèmes d’analyse d’images ou affichées sur un site Web, car elles sont faciles à copier, à stocker et à archiver. Elles peuvent également être facilement annotées à l’aide d’un logiciel approprié pour être intégrées dans des présentations ou des archives. Alors que les images photographiques peuvent être scannées dans un ordinateur pour produire des images numériques – la capture d’images numériques dès le départ permet d’économiser du temps et des efforts.

La plupart des appareils photo numériques sont du principe « pointer et cliquer » – peu ou pas d’expertise photographique est nécessaire. La photomicrographie traditionnelle, en revanche, exige une certaine connaissance des techniques photographiques. Les utilisateurs doivent comprendre les avantages et les inconvénients des différents types de films photographiques, faire attention aux filtres qu’ils utilisent et avoir une certaine compréhension de la relation entre les ouvertures des objectifs, les vitesses d’obturation, la profondeur de champ et, pour la photomicrographie en couleur, la température de couleur. Les résultats peuvent être variables, surtout pour les novices, d’où la pratique importante du « bracketing » des expositions pour les images critiques, c’est-à-dire prendre au moins trois photos distinctes pour s’assurer qu’au moins une des photos est réussie. Cette pratique augmente toutefois les coûts des films et du traitement. L’imagerie numérique n’entraîne pas de coûts permanents – il n’y a pas de frais de film ou de traitement.

L’imagerie numérique est presque instantanée. La plupart des appareils photo ont un écran LCD qui permet de visualiser l’image et les photos peuvent être rapidement transférées sur un PC. Une décision peut être prise immédiatement pour savoir si l’image est satisfaisante. Le film, en revanche, doit être développé et traité avant de pouvoir être vu. À ce moment-là, le sujet peut ne plus exister, surtout dans les cas où les microscopistes enregistrent des événements dynamiques dans des cellules vivantes.

Que rechercher dans un appareil photo numérique

Les appareils photo sont disponibles avec une sortie numérique ou analogique. Pour la sortie analogique, il existe plusieurs normes différentes comme PAL, NTSC ou RS-170 et pour la transmission des données, il existe également différents formats comme RGB, S-VHS ou composite. Les signaux analogiques doivent être transformés en signaux numériques à l’aide d’une carte d’acquisition avant de pouvoir être envoyés à un ordinateur, alors que dans une caméra numérique, le signal envoyé à l’ordinateur est déjà au format numérique. Cela réduit le bruit et rend évidemment inutile l’utilisation d’une carte d’acquisition d’images. Les signaux numériques peuvent être transférés à l’ordinateur à l’aide de ports série ou parallèles (tous deux lents), de l’USB (plus rapide mais disponible sur presque tous les ordinateurs modernes), du Fire Wire (plus rapide que l’USB mais moins répandu) ou par le biais de cartes pour le bus PCI (plus rapide, largement disponible mais nécessitant l’installation de la carte).