Les bases de la DIGE 2D

La technique de l’électrophorèse sur gel bidimensionnelle (2D) est un outil puissant pour séparer des mélanges complexes de protéines, mais depuis sa création au milieu des années 1970, elle a acquis le stigmate d’être une application très difficile à maîtriser et était généralement utilisée au mieux par des experts. L’introduction de gradients de pH immobilisés disponibles dans le commerce au début des années 1990 a permis d’améliorer la reproductibilité et de simplifier les protocoles, ce qui a entraîné une forte augmentation de la popularité de la technique. Cependant, la variation d’un gel à l’autre restait difficile à contrôler sans l’utilisation de réplicats techniques. Au milieu des années 1990 (en même temps que la naissance de la « protéomique »), le concept de multiplexage de protéines marquées par fluorescence pour la séparation sur gel 2D a été réalisé par le groupe de Jon Minden et a permis de concevoir des expériences visant à éliminer pratiquement toute variation d’un gel à l’autre, ce qui a permis d’utiliser des réplicats biologiques pour l’analyse statistique et de détecter de très petits changements dans l’abondance relative des protéines. Cette technologie est appelée électrophorèse sur gel de différence 2D (2D DIGE).