— FRAPcms

La FRAP est une méthode de microscopie à fluorescence permettant d’étudier la mobilité des molécules marquées par fluorescence dans les cellules vivantes. Elle est appliquée pour l’analyse de la diffusion des molécules dans la cellule, la fluidité des bio membranes et la liaison des protéines.

Principe:

La FRAP peut être réalisée à l’aide d’un microscope confocal moderne. Elle nécessite un marquage fluorescent de la molécule d’intérêt, par un anticorps marqué GFP, par exemple. Une expérience FRAP typique comporte trois phases distinctes. Tout d’abord, la fluorescence initiale est mesurée dans la région d’intérêt. Ensuite, les molécules fluorescentes sont photo-blanchies dans une zone sélectionnée. Pour ce faire, on focalise le faisceau laser sur la zone concernée, ce qui entraîne une illumination et une extinction intenses des fluorophores. En conséquence, une zone sombre peut être observée dans l’échantillon autrement fluorescent. Enfin, les molécules fluorescentes de l’environnement peuvent diffuser à travers l’échantillon et remplacer les molécules photo-blanchies par des molécules intactes. Cette récupération de la fluorescence est mesurée dans le temps.

Puisque de nombreux facteurs peuvent influencer la cinétique de récupération, les expériences FRAP doivent être bien planifiées et les données résultantes doivent être analysées avec soin. Il est alors possible d’obtenir le coefficient de diffusion et les paramètres de mobilité des molécules à l’aide de modélisations mathématiques.