Collagénase A

Description générale

La collagénase est une protéase qui clive la protéine à triple hélice appelée collagène. Clostridium histolyticum produit six types de collagénases à savoir, α, β, γ, δ, ε et λ. Ces collagénases sont actives contre le tissu conjonctif et montrent plus de réactivité envers la gélatine qu’envers le collagène. La collagénase obtenue à partir de Clostridium histolyticum a une très forte activité, car elle digère le collagène par les deux extrémités, à des températures aussi basses que 4-10 °C.

Spécificité

La collagénase dégrade le collagène natif. La clostripaïne, les enzymes de type trypsine et les protéases neutres dégradent également d’autres protéines.
Activité enzymatique :
Activité collagénase : >0,15U/mg (selon Wünsch) (+25°C, 4-phényl-azobenzyl-oxycarbonyl-Pro-Leu-Gly-Pro-D-Arg comme substrat)
Activités enzymatiques contaminantes : trypsine, clostripaïne, et activité protéolytique neutre
La collagénase A présente un rapport équilibré d’activités enzymatiques.

Application

La collagénase de C. histolyticum est largement utilisée pour la désagrégation de nombreux types de tissus (par exemple, poumon, cœur, muscle, os, tissu adipeux, foie, rein, cartilage, glande mammaire, placenta, vaisseaux sanguins, cerveau, tumeurs, cordon ombilical) et pour la préparation de suspensions unicellulaires pour l’établissement de systèmes de culture cellulaire primaire. La collagénase A est recommandée lorsque le rendement, la viabilité et la fonctionnalité sont importants.
La collagénase de Clostridium de Roche a été utilisée pour préparer des cellules à partir de nombreux types de tissus, tels que les hépatocytes, les adipocytes, les îlots pancréatiques, les cellules épithéliales, les cellules musculaires, les cellules endothéliales, etc. Cependant, l’adéquation de chaque lot de l’enzyme pour la perturbation d’un tissu particulier doit être déterminée de manière empirique.

Unité Définition

Contenu
Lyophilisat, non stérile

Unité Définition : La collagénase de Roche est dosée en unités Wünsch (1 μmol de produit formé par minute à +25 °C avec le substrat Wünsch).
Fréquemment, les activités collagénasiques sont données en unités Mandl (1 μmol de leucine libérée du collagène en 5 heures à +37 °C).
Malheureusement, il n’existe pas de facteur de conversion cohérent entre les deux unités d’activité, car l’unité Mandl dépend, en partie, de la concentration de protéases contaminantes dans la préparation de collagénase, une variable indéfinissable. Une préparation de collagénase plus pure donnerait en fait une activité spécifique plus faible en unités Mandl qu’une préparation brute. Les préparations de Clostridium donnent généralement des facteurs de conversion d’environ 1:1800 (par exemple, un lot particulier de collagénase de Clostridium contenait environ 0,15 Wünsch U/mg et 250 Mandl U/mg).

Note de préparation

Activateur : Ca2+
Inhibiteurs:
Inhibiteurs de la collagénase : EDTA, EGTA, Cys, His, DTT, 2-mercapto-éthanol
La collagénase n’est pas inhibée par le sérum.
Inhibiteurs de la chlorostripine : TLCK
Inhibiteurs de trypsine : aprotinine, inhibiteur de trypsine (blanc d’œuf, soja), sérum
Concentration de travail : 0,5 à 2,5 mg/ml
Conditions de conservation (solution de travail) : -15 à -25 °C
Roche recommande de ne reconstituer que la quantité de lyophilisat nécessaire pour une utilisation immédiate. La solution reconstituée peut être conservée entre -15 et -25 °C pendant une semaine maximum. Evitez les congélations et décongélations répétées car l’activité diminue après reconstitution.

Reconstitution

Reconstitution dans toute solution saline équilibrée (par exemple, HBSS)

Autres notes

Pour la recherche en sciences de la vie uniquement. Ne pas utiliser dans les procédures de diagnostic.

Les conditions d’expédition peuvent varier

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