Caractérisation d’un complexe ADN-protéine et de sous-unités capsomères dérivés du virus du polyome par traitement avec l’acide éthylèneglycol-bis-N,N’-tétraacétique et le dithiothréitol

Le traitement des virions de polyome avec l’acide éthylèneglycol-bil-N,N’-tétraacétique (EGTA) et le dithiothréitol (DTT) à pH 8.5 a entraîné la dissociation des virions en un complexe ADN-protéine et en sous-unités capsomères structurelles individuelles. La valeur de sédimentation du complexe ADN-protéine dans les gradients de saccharose était d’environ 48S, et il avait une densité de 1,45 g/cm3 dans les gradients de CsCl à l’équilibre. L’analyse alcaline du saccharose de l’ADN dans ce complexe ADN-protéine a démontré qu’environ 75 % de l’ADN est le composant 1. Les protéines associées à l’ADN ont été dissociées par traitement avec du NaCl ou le détergent anionique Sarkosyl. VP1 et les protéines d’histone VP 4–7 étaient les principales protéines associées à l’ADN. Le traitement du complexe ADN-protéine avec un pH alcalin a entraîné l’élimination spécifique de FP1. La microscopie électronique du complexe ADN-protéine 48S a montré qu’il s’agit d’une structure très étroitement enroulée qui est légèrement plus grande que le virion intact. Le traitement du complexe avec du NaCl ou un tampon à pH 10,5 a entraîné une perte de protéines et un relâchement ultérieur du complexe ADN-protéine, de sorte que l’ADN peut être visualisé. Les sous-unités capsomères libérées à la suite du traitement à l’EGTA-DTT ont sédimenté sous forme de sous-unités 18S, 12S et 5S dans des gradients de saccharose. L’analyse électrophorétique des capsomères isolés a démontré que VP1, VP2 et VP3 étaient présents dans chaque espèce, bien que les ratios des protéines varient. En plus des protéines structurelles, on a constaté que les histones VP 4–7 étaient principalement associées à la sous-unité 5S du capsomère.