Mitä eroja on FPLC:n ja HPLC:n välillä

FPLC on lyhenne sanoista fast protein liquid chromatography (nopea proteiininestekromatografia) ja HPLC on lyhenne sanoista high performance liquid chromatography (korkean suorituskyvyn nestekromatografia). Vaikka molemmat tekniikat ovat samankaltaisia, niiden kromatografisissa menetelmissä on merkittäviä eroja. HPLC on analyysitekniikka, jota käytetään pääasiassa nestemäisten näytteiden kvantitatiiviseen ja kvalitatiiviseen analyysiin. Toisaalta FPLC on puhdistustekniikka, jota käytetään proteiiniseosten erottamiseen ja kiinnostavien erillisten komponenttien keräämiseen. Sekä HPLC:ssä että FPLC:ssä käytetään pumppuja, ilmaisimia, venttiileitä ja ohjelmistoja, mutta FPLC:ssä käytetään myös pH- ja johtokykymittareita sekä fraktiokerääjiä. Toinen tapa erottaa HPLC ja FPLC toisistaan on se, että HPLC:tä pidetään analyyttisenä tekniikkana, kun taas FPLC on preparatiivinen tekniikka.

HPLC:ssä käytetään useita menetelmiä erottamiseen, joista käänteisfaasikromatografia on yleisin. HPLC käyttää liuottimia liikkuvana faasina ja FPLC käyttää suolapuskureita liikkuvana faasina. FPLC:ssä käytetään useita puhdistusmenetelmiä, kuten ioninvaihtoa, geelisuodatusta ja affiniteettia sekä muita vähemmän käytettyjä menetelmiä. FPLC-puhdistus on yleensä monivaiheinen prosessi, joka sisältää menetelmien yhdistelmän.

HPLC-pumppupäitä valmistetaan ruostumattomasta teräksestä, ja virtausnopeus ei yleensä ylitä 10 ml/min, kun taas vastapainekapasiteetti on tyypillisesti 6 000 psi ja enemmän. FPLC-pumppupäitä valmistetaan joko titaani- tai PEEK-materiaaleista, ja penkkipumput voivat tuottaa jopa 150 ml/min virtausnopeuden, mutta vastapaine on noin 725 psi näillä suurilla virtausnopeuksilla. Virtausnopeudet FPLC:ssä ovat yleensä suuremmat kuin HPLC:ssä, jossa vastapaineet ovat tyypillisesti pienemmät.

Kolonnit eroavat toisistaan myös kolonnimateriaalien ja hiukkaskokojen osalta. HPLC-kolonnit on valmistettu ruostumattomasta teräksestä. FPLC-kolonnit valmistetaan joko lasirungoista, joissa on korkean suorituskyvyn hartsin ylä- ja alaosat, tai PEEK:stä.

Useimmat HPLC-hartsit valmistetaan piihelmistä, joiden hiukkaskoko on pieni ja jotka kestävät hyvin korkeita vastapaineita. FPLC:ssä käytetään agaroosia, polymeerimateriaaleja tai piidioksidimateriaaleja. FPLC:n hiukkaskoot ovat suurempia ja niissä on suuret huokoskoot. FPLC-hartsit eivät kestä yhtä hyvin erittäin korkeita vastapaineita aiemmin mainittujen materiaalien ja kokojen vuoksi.

HPLC:ssä käytetään yleensä ruostumatonta terästä virtausreitillä. FPLC:n virtausreitissä ruostumatonta terästä vältetään ja se korvataan titaanilla, PEEK:llä ja muilla korkean suorituskyvyn komposiiteilla.

HPLC:tä käytetään pienten molekyylipainojen yhdisteiden erottamiseen. FPLC:tä käytetään suurten biomolekyylien, kuten proteiinien, nukleotidien ja peptidien, puhdistamiseen.

Myös ohjelmistot eroavat näiden kahden tekniikan välillä. HPLC-kromatografiaohjelmisto ohjaa laitteistoa ja analysoi tietoja. FPLC-ohjelmisto ohjaa moduuleja sekä integroi puhdistettujen näytteiden keräämisen fraktiokeräimeen. UV-absorption seurannan lisäksi FPLC-järjestelmät seuraavat myös pH:ta ja johtavuutta.

Sekä HPLC:n että FPLC:n suorituskyky on parantunut niiden käyttöönoton jälkeen. Waters Corporation toi ensimmäisen HPLC:n kaupallisesti markkinoille vuonna 1969. Ensimmäisen FPLC-järjestelmän kehitti Pharmacia vuonna 1982. Nykyään enemmän yrityksiä tarjoaa HPLC-ratkaisuja kuin FPLC-ratkaisuja.