Collagenase A

Yleiskuvaus

Kollagenaasi on proteaasi, joka pilkkoo kollageeniksi kutsuttua kolmoiskierteistä proteiinia. Clostridium histolyticum tuottaa kuutta erilaista kollagenaasityyppiä, nimittäin α-, β-, γ-, δ-, ε- ja λ-tyyppejä. Nämä kollagenaasit ovat aktiivisia sidekudosta vastaan, ja ne reagoivat enemmän gelatiiniin kuin kollageeniin. Clostridium histolyticum -bakteerista saadulla kollagenaasilla on erittäin voimakas aktiivisuus, sillä se pilkkoo kollageenia molemmista päistä jopa 4-10 °C:n lämpötilassa.

Spesifisyys

Kollagenaasi hajottaa natiivia kollageenia. Klostripaiini, trypsiinin kaltaiset entsyymit ja neutraaliproteaasit hajottavat myös muita proteiineja.
entsyymiaktiivisuus:
Kollagenaasiaktiivisuus: >0,15U/mg (Wünschin mukaan) (+25°C, substraattina 4-fenyyli-atsobentsyyli-oksikarbonyyli-Pro-Leu-Gly-Pro-D-Arg)
Kontaminoivien entsyymien aktiivisuus: trypsiini-, klostripaiini- ja neutraaliproteolyyttinen aktiivisuus
Kollagenaasi A:lla on tasapainoinen suhde entsyymiaktiivisuuksia.

Käyttökohteet

C. histolyticum -bakteerista peräisin olevaa kollagenaasia käytetään laajalti monenlaisten kudosten (esim. keuhkojen, sydämen, lihaksen, luun, rasvakudoksen, maksan, munuaisten, rustojen, maitorauhasen, istukan, verisuonten, aivojen, kasvainten, napanuoran) pilkkomiseen ja yksittäisten solususpensioiden valmistamiseen primaaristen solukkoviljelysysteemien perustamista varten. Kollagenaasi A:ta suositellaan silloin, kun saanto, elinkelpoisuus ja toiminnallisuus ovat tärkeitä.
Rochen valmistamaa Clostridium-kollagenaasia on käytetty solujen valmistamiseen monista kudostyypeistä, kuten hepatosyyteistä, adiposyyteistä, haiman saarekkeista, epiteelisoluista, lihassoluista, endoteelisoluista jne. Kunkin entsyymierän soveltuvuus tietyn kudoksen hajottamiseen on kuitenkin määritettävä empiirisesti.

Yksikkömääritelmä

Sisältö
Lyofilisaatti, ei-steriili

Yksikkömääritelmä: Rochen kollagenaasi määritetään Wünsch-yksikköinä (1 μmol tuotetta muodostuu minuutissa +25 °C:ssa Wünsch-substraatilla).
Usein kollagenaasiaktiivisuus ilmoitetaan Mandl-yksikköinä (1 μmol leusiinia vapautuu kollageenista 5 tunnissa +37 °C:ssa).
Valitettavasti näiden kahden aktiivisuusyksikön välillä ei ole johdonmukaista muuntokerrointa, koska Mandl-yksikkö riippuu osittain kontaminoivien proteaasien pitoisuudesta kollagenaasivalmisteessa, joka on määrittelemätön muuttuja. Puhtaampi kollagenaasivalmiste antaisi itse asiassa alhaisemman spesifisen aktiivisuuden Mandl-yksikköinä ilmaistuna kuin raaka valmiste. Clostridium-valmisteiden muuntokertoimet ovat tyypillisesti noin 1:1800 (esim. tietty erä Clostridium-kollagenaasia sisälsi noin 0,15 Wünsch U/mg ja 250 Mandl U/mg).

Valmistehuomautus

Aktivaattori:
Inhibiittorit:
Kollagenaasin inhibiittorit: EDTA, EGTA, Cys, His, DTT, 2-merkaptoetanoli
Kollagenaasia ei inhiboi seerumi.
Klostripaiini-inhibiittorit: TLCK
Trypsiini-inhibiittorit: aprotiniini, trypsiini-inhibiittori (munanvalkuainen, soijapapu), seerumi
Työskentelykonsentraatio: 0,5-2,5 mg/ml
Säilytysolosuhteet (käyttöliuos): -15 – -25 °C
Roche suosittelee, että vain välittömään käyttöön tarvittava määrä lyofilisaattia valmistetaan uudelleen. Palautettu liuos voidaan säilyttää -15 – -25 °C:ssa enintään viikon ajan. Vältä toistuvaa jäädyttämistä ja sulattamista, koska aktiivisuus vähenee uudelleenvalmistuksen jälkeen.

Rekonstituutio

Rekonstituutio mihin tahansa tasapainotettuun suolaliuokseen (esim. HBSS)

Muut huomautukset

Vain biotieteelliseen tutkimukseen. Ei käytettäväksi diagnostisissa toimenpiteissä.

Toimitusolosuhteet voivat vaihdella