— FRAPcms

FRAP es un método de microscopía de fluorescencia para estudiar la movilidad de moléculas marcadas con fluorescencia en células vivas. Se aplica para el análisis de la difusión de moléculas dentro de la célula, la fluidez de las bio-membranas y la unión de proteínas.

Principio:

FRAP puede llevarse a cabo utilizando un moderno microscopio confocal. Necesita el etiquetado fluorescente de la molécula de interés, mediante un anticuerpo marcado con GFP, por ejemplo. Un experimento típico de FRAP implica tres fases distintas. En primer lugar, se mide la fluorescencia inicial en la región de interés. A continuación, las moléculas fluorescentes se fotoblanquean dentro de un área seleccionada. Para ello, se enfoca el rayo láser sobre la zona correspondiente, lo que provoca una iluminación intensa y la extinción de los fluoróforos. Como resultado, se observa una zona oscura en la muestra, que por lo demás es fluorescente. Finalmente, las moléculas fluorescentes de los alrededores pueden difundirse a través de la muestra e intercambiar las moléculas fotoblanqueadas por otras intactas. Esta recuperación de la fluorescencia se mide a lo largo del tiempo.

Dado que muchos factores pueden influir en la cinética de recuperación, los experimentos FRAP deben planificarse bien y los datos resultantes deben analizarse cuidadosamente. A continuación, es posible obtener el coeficiente de difusión y los parámetros de movilidad de la molécula mediante la modelización matemática.