Fluorómetro

Un diseño simplista de los componentes de un fluorómetro

Típicamente los fluorómetros utilizan un doble haz. Estos dos haces trabajan en tándem para disminuir el ruido creado por las fluctuaciones de la potencia radiante. El haz superior pasa por un filtro o monocromador y atraviesa la muestra. El haz inferior pasa a través de un atenuador y se ajusta para tratar de igualar la potencia fluorescente emitida por la muestra. La luz de la fluorescencia de la muestra y el haz inferior atenuado son detectados por transductores separados y convertidos en una señal eléctrica que es interpretada por un sistema informático.

Dentro de la máquina, el transductor que detecta la fluorescencia creada por el haz superior está situado a una distancia de la muestra y en un ángulo de 90 grados respecto al haz superior incidente. La máquina está construida así para disminuir la luz parásita del haz superior que puede incidir en el detector. El ángulo óptimo es de 90 grados.Hay dos enfoques diferentes para manejar la selección de la luz incidente que da lugar a diferentes tipos de fluorómetros. Si se utilizan filtros para seleccionar las longitudes de onda de la luz, la máquina se llama fluorómetro. Mientras que un espectrofluorómetro suele utilizar dos monocromadores, algunos espectrofluorómetros pueden utilizar un filtro y un monocromador. En este caso, el filtro de banda ancha actúa para reducir la luz parásita, incluida la procedente de órdenes de difracción no deseadas de la rejilla de difracción del monocromador.

Las fuentes de luz para los fluorómetros suelen depender del tipo de muestra que se está analizando. Una de las fuentes de luz más comunes para los fluorómetros es la lámpara de mercurio de baja presión. Ésta proporciona muchas longitudes de onda de excitación, por lo que es la más versátil. Sin embargo, esta lámpara no es una fuente continua de radiación. La lámpara de arco de xenón se utiliza cuando se necesita una fuente continua de radiación. Ambas fuentes proporcionan un espectro adecuado de luz ultravioleta que induce la quimioluminiscencia. Estas son sólo dos de las muchas fuentes de luz posibles.

Las cubetas de vidrio y de sílice suelen ser los recipientes en los que se coloca la muestra. Hay que tener cuidado de no dejar huellas dactilares o cualquier otro tipo de marca en el exterior de la cubeta, porque esto puede producir una fluorescencia no deseada. A veces se utilizan disolventes de «grado espectro», como el metanol, para limpiar las superficies de los recipientes y minimizar estos problemas.