Cuáles son las diferencias entre FPLC y HPLC

FPLC significa cromatografía líquida rápida de proteínas y HPLC significa cromatografía líquida de alto rendimiento. Aunque ambas técnicas son similares, existen diferencias significativas en sus métodos cromatográficos. La HPLC es una técnica analítica utilizada principalmente para el análisis cuantitativo y cualitativo de muestras líquidas. Por otro lado, la FPLC es una técnica de purificación que se utiliza para separar mezclas de proteínas y recoger los componentes separados de interés. Mientras que tanto la HPLC como la FPLC utilizan bombas, detectores, válvulas y software, la FPLC también utiliza monitores de pH y conductividad, así como colectores de fracciones. Otra forma de diferenciar la HPLC de la FPLC es que la HPLC se considera una técnica analítica mientras que la FPLC es una técnica preparatoria.

En la HPLC se utilizan varios métodos para las separaciones, siendo la cromatografía de fase inversa la más frecuente. La HPLC utiliza disolventes para la fase móvil y la FPLC utiliza tampones salinos para la fase móvil. La FPLC utiliza varios métodos de purificación, como el intercambio iónico, la filtración en gel y la afinidad, así como otros métodos menos utilizados. La purificación por FPLC suele ser un proceso de varios pasos que incluye una combinación de métodos.

Los cabezales de las bombas de FPLC son de acero inoxidable y la capacidad de flujo no suele superar los 10 ml/min, mientras que la capacidad de contrapresión suele ser de 6000 psi y superior. Los cabezales de las bombas de FPLC se fabrican con materiales de titanio o PEEK y las bombas de sobremesa pueden suministrar caudales de hasta 150 ml/min, pero las contrapresiones son de aproximadamente 725 psi a estos caudales elevados. Los caudales en la FPLC suelen ser mayores que en la HPLC, donde las contrapresiones suelen ser menores.

Las columnas también difieren, así como los materiales de las columnas y los tamaños de las partículas. Las columnas de HPLC están hechas de acero inoxidable. Las columnas de FPLC están hechas de cuerpos de vidrio con tapas y fondos de resina de alto rendimiento o de PEEK.

La mayoría de las resinas de HPLC están hechas de perlas de sílice con tamaños de partícula pequeños que pueden soportar contrapresiones muy altas. La FPLC utiliza agarosa, materiales poliméricos o materiales de sílice. Los tamaños de las partículas para la FPLC son más grandes y tienen grandes tamaños de poros. Las resinas de la FPLC no son tan capaces de soportar contrapresiones muy altas debido al material y los tamaños mencionados anteriormente.

La HPLC suele utilizar acero inoxidable en el recorrido del flujo. En una vía de flujo de FPLC, se evita el acero inoxidable y se sustituye por titanio, PEEK y otros compuestos de alto rendimiento.

HPLC se utiliza para separar compuestos de pequeño peso molecular. La FPLC se utiliza para purificar grandes biomoléculas como proteínas, nucleótidos y péptidos.

El software también difiere entre las dos técnicas. El software de cromatografía HPLC controla la instrumentación y analiza los datos. El software de FPLC controla los módulos, así como la integración de la recogida de las muestras purificadas en el colector de fracciones. Además de controlar la absorción UV, los sistemas FPLC también controlan el pH y la conductividad.

El rendimiento tanto de la HPLC como de la FPLC ha mejorado desde su introducción. En 1969, la primera HPLC fue introducida comercialmente por Waters Corporation. El primer sistema FPLC fue desarrollado por Pharmacia en 1982. Hoy en día, hay más empresas que ofrecen soluciones de HPLC que de FPLC.