Colagenasa A

Descripción general

La colagenasa es una proteasa que escinde la proteína triple helicoidal llamada colágeno. Clostridium histolyticum produce seis tipos de colagenasas, a saber, α, β, γ, δ, ε y λ. Estas colagenasas son activas contra el tejido conectivo y muestran más reactividad hacia la gelatina que hacia el colágeno. La colagenasa obtenida de Clostridium histolyticum tiene una actividad muy fuerte, ya que digiere el colágeno desde ambos extremos, a temperaturas tan bajas como 4-10 °C.

Especificidad

La colagenasa degrada el colágeno nativo. La clostripina, las enzimas similares a la tripsina y las proteasas neutras también degradan otras proteínas.
Actividad enzimática:
Actividad de la colagenasa: >0,15U/mg (según Wünsch) (+25°C, 4-fenil-azobencil-oxicarbonil-Pro-Leu-Gly-Pro-D-Arg como sustrato)
Actividades enzimáticas contaminantes: tripsina, clostripina y actividad proteolítica neutra
La colagenasa A tiene una relación equilibrada de actividades enzimáticas.

Aplicación

La colagenasa de C. histolyticum se utiliza ampliamente para la disgregación de muchos tipos de tejidos (por ejemplo, pulmón, corazón, músculo, hueso, tejido adiposo, hígado, riñón, cartílago, glándula mamaria, placenta, vasos sanguíneos, cerebro, tumores, cordón umbilical) y para la preparación de suspensiones unicelulares para el establecimiento de sistemas de cultivo celular primario. La colagenasa A se recomienda cuando el rendimiento, la viabilidad y la funcionalidad son importantes.
La colagenasa Clostridium de Roche se ha utilizado para preparar células de muchos tipos de tejidos, como hepatocitos, adipocitos, islotes pancreáticos, células epiteliales, células musculares, células endoteliales, etc. Sin embargo, la idoneidad de cada lote de la enzima para la disrupción de un tejido particular debe determinarse empíricamente.

Definición de la unidad

Contenido
Liofilizado, no estéril

Definición de la unidad: La colagenasa de Roche se ensaya en unidades Wünsch (1 μmol de producto formado por minuto a +25 °C con sustrato Wünsch).
Frecuentemente, las actividades de la colagenasa se dan en unidades Mandl (1 μmol de leucina liberada del colágeno en 5 horas a +37 °C).
Desgraciadamente, no existe un factor de conversión consistente entre las dos unidades de actividad, ya que la unidad Mandl depende, en parte, de la concentración de proteasas contaminantes en la preparación de colagenasa, una variable indefinible. Una preparación de colagenasa más pura daría en realidad una actividad específica más baja en unidades Mandl que una preparación cruda. Las preparaciones de Clostridium suelen dar factores de conversión de aproximadamente 1:1800 (por ejemplo, un lote particular de colagenasa de Clostridium contenía aproximadamente 0,15 Wünsch U/mg y 250 Mandl U/mg).

Nota de preparación

Activador: Ca2+
Inhibidores:
Inhibidores de la colagenasa: EDTA, EGTA, Cys, His, DTT, 2-mercapto-etanol
La colagenasa no es inhibida por el suero.
Inhibidores de la clostripina: TLCK
Inhibidores de la tripsina: aprotinina, inhibidor de la tripsina (clara de huevo, soja), suero
Concentración de trabajo: 0,5 a 2,5 mg/ml
Condiciones de almacenamiento (solución de trabajo): -15 a -25 °C
Roche recomienda reconstituir sólo la cantidad de liofilizado necesaria para su uso inmediato. La solución reconstituida puede almacenarse entre -15 y -25 °C durante un máximo de una semana. Evitar la congelación y descongelación repetida ya que la actividad disminuye después de la reconstitución.

Reconstitución

Reconstitución en cualquier solución salina equilibrada (por ejemplo, HBSS)

Otras notas

Sólo para investigación en ciencias de la vida. No para uso en procedimientos de diagnóstico.

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