Caracterización de un complejo ADN-proteína y de subunidades de capsómeros derivados del virus del polioma mediante el tratamiento con ácido etilenglicol-bis-N,N’-tetraacético y ditiotreitol

El tratamiento de viriones de polioma con ácido etilenglicol-bil-N,N’-tetraacético (EGTA) y ditiotreitol (DTT) a pH 8.La disociación de los viriones en un complejo ADN-proteína y en subunidades capsoméricas estructurales individuales se produjo a un pH de 5. El valor de sedimentación del complejo ADN-proteína en gradientes de sacarosa era de aproximadamente 48S, y tenía una densidad de 1,45 g/cm3 en gradientes de CsCl en equilibrio. El análisis con sacarosa alcalina del ADN dentro de este complejo ADN-proteína demostró que aproximadamente el 75% del ADN es el componente 1. Las proteínas asociadas al ADN se disociaron mediante tratamiento con NaCl o con el detergente aniónico Sarkosyl. La VP1 y las proteínas histónicas VP 4–7 fueron las principales proteínas asociadas al ADN. El tratamiento del complejo ADN-proteína con pH alcalino dio lugar a la eliminación específica de FP1. La microscopía electrónica del complejo ADN-proteína 48S demostró que se trata de una estructura muy enrollada que es ligeramente más grande que el virión intacto. El tratamiento del complejo con NaCl o con un tampón de pH 10,5 provocó la pérdida de la proteína y el subsiguiente aflojamiento del complejo ADN-proteína, de manera que el ADN pudo ser visualizado. Las subunidades de los capsómeros liberadas como resultado del tratamiento con EGTA-DTT sedimentaron como subunidades 18S, 12S y 5S en gradientes de sacarosa. El análisis electroforético de los capsómeros aislados demostró que VP1, VP2 y VP3 estaban presentes en cada especie, aunque las proporciones de las proteínas variaban. Además de las proteínas estructurales, se encontró que las histonas VP 4–7 se asociaban predominantemente con la subunidad 5S de los capsómeros.