PLOS ONE

Materialer og metoder

Undersøgelsesdesign

Dette forsøg anvendte et kvasi-eksperimentelt enarmet tidsseriedesign.

Deltagere og omgivelser

Denne undersøgelse var en gennemførlighedsundersøgelse. Prøvestørrelsen var baseret på tidligere forskning, der rapporterede om spyt OT-niveauet fra 11 ammende kvinder . Tidligere undersøgelser, der rapporterede om plasma OT-niveauet hos gravide kvinder, involverede omkring 10 til 20 forsøgspersoner . Kriterierne for at komme i betragtning var som følger: planlagt at føde en enkeltfødsel ved spontan cephalisk fødsel; mellem 38 og 40 ugers gestation; asiatisk og kan læse og skrive japansk; modtaget tilladelse fra fødselslægen eller jordemoderen til at deltage. Udelukkelseskriterierne var som følger: tager medicin i forbindelse med deres graviditet; har medicinske komplikationer eller graviditetskomplikationer og psykisk sygdom; har en medicinsk historie om behandling med assisteret reproduktionsteknologi; et BMI > 25 før graviditeten; planlagt fremkaldt fødsel; har oplevet langvarig graviditet; har tidligere haft kejsersnit; ammer et barn. Et flowdiagram, der viser rekrutteringen af undersøgelsesdeltagerne, er vist i fig. 1.

Expand

Når kvalificerede gravide kvinder i 34 ugers graviditet besøgte ambulatoriet til en prænatal kontrol, forklarede vi mundtligt vores forskning på et sted uden en sygeplejerske eller en obstetriker. Efter at have indhentet samtykke besluttede vi sammen med deltageren den første interventionsdag efter 38 uger af graviditeten. Kvinderne fik også en refusionsformular på det tidspunkt med en forklaring om, at de til enhver tid kan trække sig tilbage uden ulempe. I dataindsamlingsfaciliteten i denne undersøgelse udføres bækkenundersøgelse for alle gravide kvinder efter 37 ugers kontrolundersøgelsen. Membranfejning kan udføres efter en fødselslæges skøn efter 39 svangerskabsuger.

Forekomsterne blev afholdt på hospitalet i 3 på hinanden følgende dage. Der var nogle forsøgspersoner, som fik perinatal kontrol af obstetriker før og efter forsøget. Data blev indsamlet på et enkelt barselshospital i Kanagawa, Japan mellem juni 2015 og august 2015.

Forskningsprotokollen blev godkendt af Institutional Review Board of St. Luke’s International University, Tokyo, Japan (nr. 15-011). Denne undersøgelse blev registreret i Clinical Trials Registry of University Hospital Medical Information Network i Japan (UMIN000017911).

Procedurer

Interventionstiden for bryststimulering var 3 dage. Det samme tidspunkt på dagen blev anvendt for at kontrollere for døgnvirkninger. Spyt blev indsamlet inden for perioden fra kl. 10:00 til 16:00. Deltagerne blev bedt om at afholde sig fra samleje og drikke alkohol før interventionsdagen. De blev også instrueret om at afslutte deres måltid, børste deres tænder og ikke ryge 1 time før interventionen. De blev også bedt om ikke at bruge læbestift. Forsøget blev startet 30 minutter efter indtagelse af 100 mL vand.

I starten af undersøgelsen blev livmoderhalsens score vurderet for cervikal modning (fig. 2; cervikal kontrol) ved hjælp af en modificeret Bishop Score. Cervikal modning kan være en mulig mulighed for at evaluere interventionen i forhold til slutpunktet. Evaluatorerne bestod af 3 jordemødre, der har 10 års erfaring for at standardisere vurderingen.

Udvide

Deltagerne udførte bryststimulering i 3 dage sammen med en jordemoder på hospitalet. For at standardisere interventionsteknikken demonstrerede en jordemoder, hvordan man udfører bryststimulering i 10 minutter ved hjælp af en brystmodel fremstillet af uld og et trykmåleinstrument (Perineometer, OWOMED, Gyeonggido, Sydkorea). Det anbefalede stimuleringstryk var mellem 20 og 50 mmHg, hvilket er et blidt tryk, der ikke skader brystvorten. For at opnå en stimuleringsrytme på 69 slag i minuttet blev der anvendt en lysende elektrisk metronom (SQ50V, Seiko Watch Corporation, Tokyo, Japan) uden lyd som vejledning. Hvert bryst blev stimuleret i 15 minutter, begyndende på højre side, idet der blev vekslet mellem brysterne for at undgå uterin hyperstimulering, i alt 1 time om dagen. Stimulering af brysterne blev udført ved at klemme brystet i en grad, der ikke gjorde ondt, startende fra den ydre areola til brystvorten ved hjælp af tommelfingeren, pegefingeren og langfingeren. Direkte selvstimulering af brystet blev udført ved hjælp af enten venstre eller højre hånd med ren hesteolie (Sonbahyu; Yakushido, Fukuoka, Japan). For at imødegå bekymringer eller bekymringer vedrørende andres tilstedeværelse under bryststimulering blev der anvendt et ammeindlæg. Vi forvaltede tiden og meddelte deltagerne.

Kardiotokografi (CTG)-aflæsninger blev opnået under interventionen for at registrere livmoderaktivitet og kontrollere fosterets hjertefrekvens. Adækvate uteruskontraktioner blev defineret som mindst 3 sammentrækninger af 40 sekunders varighed hver, der fandt sted inden for 10 minutter. Hyppigheden af uteruskontraktioner kan også være en mulig mulighed for at evaluere interventionen i forhold til slutpunktet. Deltagerne så en forberedt film (dvs. togture gennem Europa) for at kontrollere eksterne faktorer, der kan påvirke det eksperimentelle miljø. Efter interventionen besvarede deltagerne et spørgeskema om gennemførligheden af den eksperimentelle intervention. Cervikal modning blev revurderet ved interventionens afslutning.

Efter den eksperimentelle intervention modtog alle deltagerne et gebyr via bankoverførsel for at deltage i undersøgelsen (\3.000 eller ca. 30$).

Interventionen blev udført af 3 jordemødre bestående af førsteforfatteren og 2 forskningsassistenter. De havde tilstrækkelig CTG-læseevne opnået gennem deres mere end 5 års klinisk erfaring og over 100 tilfælde af ledelse af fødselsledelse til denne gennemførlighedsundersøgelse. Med henblik på standardisering af interventionen blev forklaringerne til deltagerne og interventionsdetaljerne forenet. Desuden deltog den første forfatter konsekvent i eksperimenterne to gange i begyndelsen for at sikre, at forskningsassistenterne kan gennemføre interventionsproceduren korrekt. Forskningsassistent A var ansvarlig for 30,3 % af eksperimenterne, B for 3,0 %, og førsteforfatteren for resten af eksperimenterne. Desuden var førsteforfatteren på 40 % af de dage, hvor forskningsassistent A var ansvarlig for eksperimenterne, på hospitalet og bekræftede standardiseringen af eksperimenterne.

Salivaindsamlingsprocedure

Spejleanalyser er relativt nemme at udføre og er minimalt invasive for gravide kvinder. Der er blevet rapporteret en moderat korrelation (r = 0,41-0,59) mellem OT-niveauet i spyt og OT-niveauet i plasma . Desuden er der vist en positiv korrelation (r = 0,89) mellem OT i spyt og OT i plasma hos patienter uden historik for selvinduceret opkastning ved anorexia nervosa .

Salivprøver blev indsamlet 10 minutter før og 15, 30, 60, 75 og 90 minutter efter bryststimuleringsinterventionen for i alt 18 prøver pr. deltager. En milliliter spyt blev indsamlet ved ustimuleret passivt savl til måling af OT-niveauet ved enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA; ENZO Life Sciences, NY, USA). ELISA-manualen angiver, at intra-assay- og inter-assay-variabilitetskoefficienterne er henholdsvis 12,6 % – 13,3 % og 11,9 % – 20,9 %.

For at standardisere spytindsamlingsproceduren blev deltagerne bedt om at samle deres spyt i munden i 3 minutter. Herefter opsamlede deltagerne ca. 1,0 mL af deres spyt for hver prøve i et 1,5 mL polypropylenrør (Eppendorf, NY, USA) ved hjælp af en spytopsamlingshjælp (Salimetrics, PA, USA). Hvis denne mængde ikke kunne opsamles efter 3 minutter, gentog deltagerne spytopsamlingsproceduren. De indsamlede prøver blev straks opbevaret i en fryser (Cryo Porter CS-80C, Scinics Corp., Tokyo, Japan) ved -80 °C. OT-niveauet blev analyseret ved hjælp af Carter et al.s metode. For andre eksperimentelle processer tilføjede vi 500 KIU/μL aprotinin efter optøning for at forhindre proteolytisk nedbrydning.

Polymorfismer af oxytocinreceptor

OT-receptor enkeltnukleotidpolymorfi er blevet rapporteret til at reducere følsomheden over for OT . Især kvinder med GG homozygote typer på OT receptor genet rs53576 rapporteres at have overgået til sen aktiv fødsel. I den foreliggende undersøgelse blev der udtaget buccalslimhindeprøver til analyse af 3 OT-receptorgenpolymorfismer (dvs. rs53576, rs2254298 og rs1042778) ved genotypning ved hjælp af TaqMan SNP-assay (Applied Biosystems, Thermo Fisher, MA, USA).

Færdighed med hensyn til praktisk anvendelighed og acceptabilitet

Vi evaluerede gennemførligheden af interventionsprotokollen til bryststimulering med hensyn til praktisk anvendelighed og acceptabilitet . Med hensyn til den praktiske anvendelighed af den eksperimentelle metode blev der taget hensyn til andelen af analyserbare prøver og forekomsten af uønskede hændelser. Med hensyn til acceptabiliteten af den eksperimentelle metode blev der taget hensyn til frafaldsraten efter interventionen. Den visuelle analoge skala (VAS), som er et af de mest valide, pålidelige og hyppigt anvendte måleinstrumenter til selvrapportering, blev anvendt i denne undersøgelse til at vurdere træthed og smerte . Kvinderne svarede på følgende kommentarer og spørgsmål ved hjælp af følgende skalaer eller : “Giv venligst din feedback vedrørende brystmassagen; 1) Blev dine arme og fingre trætte? 2) Havde du smerter i brystvorten?” og “Giv venligst din feedback vedrørende spytopsamlingen; 1) Oplevede du træthed ved spytopsamlingen?”. Der blev anvendt en Likert-skala med 4 niveauer ved besvarelsen af følgende spørgsmål: 1) “Var det ubehageligt at røre brystvorten?”, 2) “Var instruktionen for stimuleringsmetoden let at forstå?”, 3) “Ønsker du at udføre denne procedure igen ved din næste graviditet?” og 4) “Vil du gerne give oplysninger om denne teknik til dine venner?”. I betragtning af østasiaternes kulturelle baggrund, der har tendens til at vælge midtpunktet , blev der anvendt en Likert-skala med 4 niveauer til måling af holdningen for at undgå tvetydighed i forbindelse med disse spørgsmål. På den anden side blev der for stimuleringens rytme og intensitet anvendt en Likert-skala med 5 niveauer, som omfatter “moderat” som et mellemliggende valg. Desuden svarede deltagerne på spørgsmål om det miljø, hvor interventionen blev udført.

Dataanalyse

Midlerne (M), standardafvigelserne (SD), standardfejlene (SE) og medianerne for alle variabler blev beregnet. Vi anvendte en lineær blandet model ved hjælp af AR (1)-kovariansstrukturen med OT-niveauet som den afhængige variabel og dagen og tidspunktet for interventionen som faste effekter. Little’s MCAR-test blev udført. Ud over alle OT-niveauer blev alder, gestationsuger ved interventionen, obstetrisk historie, civilstand, samliv med partner og uddannelse ≥ 12 år inkluderet i imputeringsproceduren som faktorer, der påvirkede OT-niveauet. Resultatet var p = 0,980, og nulhypotesen blev ikke forkastet. Hovedårsagen til de manglende data var utilstrækkelig spytmængde og ikke manglende data på grund af OT-værdien, således afspejlede de manglende data i denne undersøgelse fuldstændig tilfældigt manglende data (MCAR). Vi brugte den multiple imputationsprocedure i SPSS Missing Values til at imputere de manglende data. Der blev oprettet fem imputerede datasæt. Dataene havde en ikke-normal fordeling. Spearmans korrelationskoefficient blev anvendt til at teste sammenhængen mellem OT-niveauet i spyt og cervikal score eller karakteristika. Statistiske analyser blev udført ved hjælp af IBM SPSS Statistics (version 22.0; Static Base and Advanced Statistics, IBM Japan, Tokyo, Japan).