Karakterisering af et DNA-protein kompleks og capsomere underenheder fra polyoma virus ved behandling med ethyleneglycol-bis-N,N'-tetraeddikesyre og dithiothreitol – PubMed

Behandling af polyoma-virioner med ethylenglycol-bil-N,N’-tetraeddikesyre (EGTA) og dithiothreitol (DTT) ved pH 8.5 resulterede i dissociation af virionerne i et DNA-proteinkompleks og individuelle strukturelle capsomerunderenheder. Sedimentationsværdien af DNA-protein-komplekset i saccharosegradienter var ca. 48S, og det havde en massefylde på 1,45 g/cm3 i ligevægts-CsCl-gradienter. Alkalisk saccharoseanalyse af DNA’et i dette DNA-proteinkompleks viste, at ca. 75 % af DNA’et er komponent 1. Proteinerne i forbindelse med DNA’et blev dissocieret ved behandling med enten NaCl eller det anioniske detergent Sarkosyl. VP1 og histonproteinerne VP 4–7 var de vigtigste proteiner, der var associeret med DNA’et. Behandling af DNA-protein-komplekset med alkaliske pH-værdier resulterede i specifik fjernelse af FP1. Elektronmikroskopi af 48S-DNA-proteinkomplekset viste, at det er en meget tæt sammenrullet struktur, der er en smule større end den intakte virion. Behandling af komplekset med enten NaCl eller med pH 10,5 buffer resulterede i tab af protein og efterfølgende løsgørelse af DNA-protein-komplekset, således at DNA’et kunne visualiseres. De capsomere underenheder, der blev frigjort som følge af EGTA-DTT-behandlingen, sedimenterede som 18S-, 12S- og 5S-underenheder i saccharosegradienter. Elektroforisk analyse af de isolerede capsomerer viste, at VP1, VP2 og VP3 var til stede i hver art, selv om forholdet mellem proteinerne varierede. Ud over de strukturelle proteiner blev histonerne VP 4–7 fundet at være overvejende associeret med 5S capsomerunderenheden.