Hvad er forskellene mellem FPLC og HPLC

FPLC står for hurtig proteinvæskekromatografi og HPLC står for højtydende væskekromatografi. Selv om begge teknikker ligner hinanden, er der betydelige forskelle i deres kromatografiske metoder. HPLC er en analyseteknik, der primært anvendes til kvantitativ og kvalitativ analyse af væskeprøver. På den anden side er FPLC en rensningsteknik, som anvendes til at adskille proteinblandinger og indsamle de adskilte komponenter af interesse. Mens både HPLC og FPLC anvender pumper, detektorer, ventiler og software, anvender FPLC også pH- og konduktivitetsmonitorer samt fraktionssamlere. En anden måde at skelne HPLC fra FPLC på er, at HPLC betragtes som en analytisk teknik, mens FPLC er en præparativ teknik.

I HPLC anvendes flere metoder til separationer, hvor omvendt fasekromatografi er den mest udbredte. HPLC anvender opløsningsmidler til den mobile fase, mens FPLC anvender saltbuffere til den mobile fase. FPLC anvender flere rensningsmetoder, herunder ionbytning, gelfiltrering og affinitet samt andre mindre anvendte metoder. FPLC-rensning er normalt en proces i flere trin, der omfatter en kombination af metoder.

HPLC-pumpehoveder er fremstillet af rustfrit stål, og flowhastigheden overstiger normalt ikke 10 ml/min, mens modtrykket typisk er på 6000 psi og derover. FPLC-pumpehoveder er fremstillet af enten titanium eller PEEK-materialer, og bænkpumper kan levere flowhastigheder på op til 150 mls/min, men modtryk på ca. 725 psi ved disse høje flowhastigheder. Flowhastighederne i FPLC er normalt højere end i HPLC, hvor modtrykkene typisk er lavere.

Skolonnerne er også forskellige, ligesom kolonnematerialerne og partikelstørrelserne er forskellige. HPLC-søjlerne er fremstillet af rustfrit stål. FPLC-kolonner er fremstillet af enten glaslegemer med top og bund af højtydende harpiks eller PEEK.

De fleste HPLC-harpikser er fremstillet af silica perler med små partikelstørrelser, der kan tåle meget høje modtryk. FPLC anvender agarose, polymermaterialer eller silica-materialer. Partikelstørrelserne til FPLC er større og har store porestørrelser. FPLC-harpikserne kan ikke i samme grad klare meget høje modtryk på grund af de tidligere nævnte materialer og størrelser.

HPLC anvender typisk rustfrit stål i strømningsvejen. I en FPLC-strømningsvej undgås rustfrit stål og erstattes af titanium, PEEK og andre højtydende kompositter.

HPLC anvendes til at adskille forbindelser med lille molekylvægt. FPLC bruges til at rense store biomolekyler såsom proteiner, nukleotider og peptider.

Softwaren adskiller sig også mellem de to teknikker. HPLC-kromatografisoftware styrer instrumenteringen og analyserer dataene. FPLC-software styrer modulerne samt integrerer indsamling af de oprensede prøver i fraktionssamleren. Ud over overvågning af UV-absorption overvåger FPLC-systemer også pH og konduktivitet.

Den ydeevne, som både HPLC og FPLC har opnået, er blevet forbedret siden deres introduktion. I 1969 blev den første HPLC kommercielt introduceret af Waters Corporation. Det første FPLC-system blev udviklet af Pharmacia i 1982. I dag er der flere virksomheder, der tilbyder HPLC-løsninger end FPLC-løsninger.