— FRAPcms

FRAP er en fluorescensmikroskopimetode til at studere mobiliteten af fluorescensmærkede molekyler i levende celler. Den anvendes til analyse af molekyldiffusion inden for cellen, fluiditet af biomembraner og proteinbinding.

Princip:

FRAP kan udføres ved hjælp af et moderne konfokalt mikroskop. Det kræver fluorescerende mærkning af det interessante molekyle, f.eks. ved hjælp af et GFP-mærket antistof. Et typisk FRAP-forsøg omfatter tre forskellige faser. Først måles den indledende fluorescens i det område, der er af interesse. Dernæst bliver de fluorescerende molekyler fotobleget inden for et udvalgt område. Dette sker ved at fokusere laserstrålen på det pågældende område, hvilket fører til intens belysning og uddøen af fluorophorerne. Som følge heraf kan der observeres et mørkt område i den ellers fluorescerende prøve. Endelig kan fluorescerende molekyler fra omgivelserne diffundere gennem prøven og udskifte de fotoblegede molekyler med intakte molekyler. Denne fluorescensgenopretning måles over tid.

Da mange faktorer kan påvirke genoprettelseskinetikken, skal FRAP-eksperimenterne planlægges godt, og de resulterende data skal analyseres omhyggeligt. Det er derefter muligt at opnå diffusionskoefficienten og molekylmobilitetsparametrene ved hjælp af matematisk modellering.