Fluorometer

Et forenklet design af komponenterne i et fluorometer

Typisk anvender fluorometre en dobbeltstråle. Disse to stråler arbejder i tandem for at mindske den støj, der skabes af udsving i stråleeffekten. Den øverste stråle ledes gennem et filter eller en monokromator og passerer gennem prøven. Den nederste stråle passerer gennem en dæmper og justeres for at forsøge at matche den fluorescerende effekt, der afgives fra prøven. Lyset fra prøvens fluorescens og den nedre, dæmpede stråle registreres af separate transducere og omdannes til et elektrisk signal, der fortolkes af et computersystem.

I maskinen er den transducer, der registrerer fluorescensen fra den øvre stråle, placeret i en afstand fra prøven og i en vinkel på 90 grader i forhold til den indfaldende, øvre stråle. Maskinen er konstrueret på denne måde for at mindske det strejelys fra den øverste stråle, der kan ramme detektoren. Den optimale vinkel er 90 grader.Der er to forskellige tilgange til håndtering af udvælgelsen af det indfaldende lys, som giver anledning til forskellige typer fluorometre. Hvis der anvendes filtre til at vælge bølgelængder af lyset, kaldes maskinen et fluorometer. Mens et spektrofluorometer typisk anvender to monokromatorer, kan nogle spektrofluorometre anvende ét filter og én monokromator. Hvor bredbåndsfilteret i dette tilfælde fungerer til at reducere strejgelys, herunder fra uønskede diffraktionsordner fra diffraktionsgitteret i monokromatoren.

Lyskilder til fluorometre er ofte afhængige af den type prøve, der testes. Blandt de mest almindelige lyskilder til fluorometre er lavtrykskviksølvlampen. Denne giver mange excitationsbølgelængder, hvilket gør den til den mest alsidige. Denne lampe er imidlertid ikke en kontinuerlig strålingskilde. Xenonbuelampen anvendes, når der er behov for en kontinuerlig strålingskilde. Begge disse kilder giver et passende spektrum af ultraviolet lys, der fremkalder kemiluminescens. Det er blot to af de mange mulige lyskilder.

Glas- og silikatkuvetter er ofte de beholdere, som prøven anbringes i. Man skal være omhyggelig med ikke at efterlade fingeraftryk eller andre former for mærker på ydersiden af kuvetten, da dette kan give uønsket fluorescens. “Spectro grade”-opløsningsmidler som f.eks. methanol anvendes undertiden til at rense karoverfladerne for at minimere disse problemer.