Collagenase A

Generel beskrivelse

Collagenase er en protease, der spalter det trippel-helikale protein kaldet kollagen. Clostridium histolyticum producerer seks typer kollagenaser, nemlig α, β, γ, δ, ε og λ. Disse kollagenaser er aktive over for bindevæv og viser større reaktivitet over for gelatine end over for kollagen. Kollagenase fra Clostridium histolyticum har en meget stærk aktivitet, da den fordøjer kollagenet fra begge ender ved temperaturer så lave som 4-10 °C.

Specificitet

Kollagenase nedbryder naturligt kollagen. Clostripain, trypsinlignende enzymer og neutrale proteaser nedbryder også andre proteiner.
Enzymaktivitet:
Collagenaseaktivitet: >0,15U/mg (ifølge Wünsch) (+25°C, 4-phenyl-azobenzyl-oxycarbonyl-Pro-Leu-Gly-Pro-D-Arg som substrat)
Collagenase A har et afbalanceret forhold mellem enzymaktiviteterne: trypsin, clostripain og neutral proteolytisk aktivitet
Collagenase A har et afbalanceret forhold mellem enzymaktiviteterne.

Anvendelse

Collagenase fra C. histolyticum anvendes i vid udstrækning til opsplitning af mange typer væv (f.eks. lunge, hjerte, muskel, knogle, fedtvæv, lever, nyre, brusk, brystkirtel, placenta, blodkar, hjerne, tumorer, navlestrenge) og til fremstilling af enkeltcelle-suspensioner til etablering af primære cellekultursystemer. Collagenase A anbefales, når udbytte, levedygtighed og funktionalitet er vigtige.
Clostridium collagenase fra Roche er blevet anvendt til fremstilling af celler fra mange vævstyper, f.eks. hepatocytter, adipocytter, bugspytkirteløer, epitelceller, muskelceller, endothelceller osv. Det bør dog afgøres empirisk, om hvert parti af enzymet er egnet til opløsning af et bestemt væv.

Enhedsdefinition

Indhold
Lyofilizat, usterilt

Enhedsdefinition: Collagenase fra Roche analyseres i Wünsch-enheder (1 μmol produkt dannet pr. minut ved +25 °C med Wünsch-substrat).
Hyppigt angives collagenaseaktiviteter i Mandl-enheder (1 μmol leucin frigjort fra collagen i 5 timer ved +37 °C).
Der findes desværre ingen konsekvent omregningsfaktor mellem de to aktivitetsenheder, da Mandl-enheden til dels afhænger af koncentrationen af kontaminerende proteaser i kollagenasepræparatet, en udefinerbar variabel. Et renere kollagenasepræparat vil faktisk give en lavere specifik aktivitet i Mandl-enheder end et råpræparat. Clostridium-præparater giver typisk omregningsfaktorer på ca. 1:1800 (f.eks. indeholdt et bestemt parti Clostridium-collagenase ca. 0,15 Wünsch U/mg og 250 Mandl U/mg).

Præparationsnote

Aktivator: Ca2+
Inhibitorer:
Collagenaseinhibitorer: EDTA, EGTA, Cys, His, DTT, 2-mercapto-ethanol
Collagenase hæmmes ikke af serum.
Clostripain-hæmmere:
Clostripain-hæmmere: EDTA, EGTA, Cys, His, DTT, 2-mercapto-ethanol
TLCK
Trypsininhibitorer: aprotinin, trypsinininhibitor (æggehvide, sojabønne), serum
Arbejdskoncentration: Opbevaringsbetingelser (arbejdsopløsning): -15 til -25 °C
Roche anbefaler, at man kun rekonstituerer den mængde lyofilizat, der er nødvendig til øjeblikkelig brug. Den rekonstituerede opløsning kan opbevares ved -15 til -25 °C i op til en uge. Undgå gentagen nedfrysning og optøning, da aktiviteten aftager efter rekonstituering.

Rekonstituering

Rekonstituering i en hvilken som helst afbalanceret saltopløsning (f.eks. HBSS)

Andre bemærkninger

Kun til biovidenskabelig forskning. Ikke til brug i diagnostiske procedurer.

Forsendelsesbetingelser kan variere