Kolagenáza A

Obecný popis

Kolagenáza je proteáza, která štěpí trojitý šroubovicový protein zvaný kolagen. Clostridium histolyticum produkuje šest typů kolagenáz, a to α, β, γ, δ, ε a λ. Tyto kolagenázy jsou aktivní vůči pojivové tkáni a vykazují větší reaktivitu vůči želatině než vůči kolagenu. Kolagenáza získaná z Clostridium histolyticum má velmi silnou aktivitu, protože tráví kolagen z obou konců, a to již při teplotách 4-10 °C.

Specifičnost

Kolagenáza rozkládá nativní kolagen. Clostripain, enzymy podobné trypsinu a neutrální proteázy degradují i jiné proteiny.
Enzymová aktivita:
Aktivita kolagenázy: >0,15U/mg (podle Wünsche) (+25 °C, 4-fenyl-azobenzyl-oxykarbonyl-Pro-Leu-Gly-Pro-D-Arg jako substrát)
Kontaminační enzymové aktivity: trypsin, klostripain a neutrální proteolytická aktivita
Kollagenáza A má vyvážený poměr enzymových aktivit.

Použití

Kolagenáza z C. histolyticum se široce používá k dezagregaci mnoha typů tkání (např. plic, srdce, svalů, kostí, tukové tkáně, jater, ledvin, chrupavek, mléčné žlázy, placenty, cév, mozku, nádorů, pupečníku) a k přípravě jednobuněčných suspenzí pro založení systémů primárních buněčných kultur. Kolagenáza A se doporučuje v případech, kdy je důležitá výtěžnost, životaschopnost a funkčnost.
Kostridiová kolagenáza od společnosti Roche se používá k přípravě buněk z mnoha typů tkání, jako jsou hepatocyty, adipocyty, pankreatické ostrůvky, epitelové buňky, svalové buňky, endotelové buňky atd. Vhodnost každé šarže enzymu pro rozrušení konkrétní tkáně by však měla být stanovena empiricky.

Definice jednotky

Obsah
Lyofilizát, nesterilní

Definice jednotky: Kolagenáza od společnosti Roche se stanovuje ve WĂ¼nschových jednotkách (1 μmol produktu vytvořeného za minutu při +25 °C s WĂ¼nschovým substrátem).
Často se aktivity kolagenázy udávají v Mandlových jednotkách (1 μmol leucinu uvolněného z kolagenu za 5 hodin při +37 °C).
Naneštěstí neexistuje konzistentní převodní faktor mezi oběma jednotkami aktivity, protože Mandlova jednotka částečně závisí na koncentraci kontaminujících proteáz v kolagenázovém preparátu, což je nedefinovatelná proměnná. Čistší kolagenázový preparát by ve skutečnosti poskytoval nižší specifickou aktivitu v Mandlových jednotkách než surový preparát. Přípravky Clostridium obvykle poskytují konverzní faktory přibližně 1:1800 (např. určitá šarže Clostridium kolagenázy obsahovala přibližně 0,15 WĂĽnsch U/mg a 250 Mandl U/mg).

Poznámka k přípravku

Aktivátor: Ca2+
Inhibitory:
Inhibitory kolagenázy: Inhibitory: EDTA, EGTA, Cys, His, DTT, 2-merkapto-ethanol
Kollagenáza není inhibována sérem.
Inhibitory klostripainu: TLCK
Inhibitory trypsinu: aprotinin, inhibitor trypsinu (vaječný bílek, sójové boby), sérum
Pracovní koncentrace: 0,5 až 2,5 mg/ml
Podmínky uchovávání (pracovní roztok): -15 až -25 °C
Roche doporučuje rekonstituovat pouze množství lyofilizátu potřebné k okamžitému použití. Rekonstituovaný roztok lze uchovávat při teplotě -15 až -25 °C po dobu až jednoho týdne. Vyvarujte se opakovaného zmrazování a rozmrazování, protože aktivita se po rekonstituci snižuje.

Rekonstituce

Rekonstituce v jakémkoli vyváženém roztoku soli (např. HBSS)

Další poznámky

Pouze pro výzkum v oblasti přírodních věd. Není určeno k použití při diagnostických postupech.

Přepravní podmínky se mohou lišit