Jaké jsou rozdíly mezi FPLC a HPLC

FPLC je zkratka pro rychlou proteinovou kapalinovou chromatografii a HPLC je zkratka pro vysokoúčinnou kapalinovou chromatografii. Ačkoli jsou si obě techniky podobné, v jejich chromatografických metodách existují významné rozdíly. HPLC je analytická technika používaná především pro kvantitativní a kvalitativní analýzu kapalných vzorků. Naproti tomu FPLC je purifikační technika, která se používá k separaci směsí proteinů a ke sběru separovaných složek, které jsou předmětem zájmu. Zatímco HPLC i FPLC používají čerpadla, detektory, ventily a software, FPLC používá také monitory pH a vodivosti a sběrače frakcí. Dalším způsobem, jak odlišit HPLC od FPLC, je, že HPLC je považována za analytickou techniku, zatímco FPLC je preparativní technika.

V HPLC se k separaci používá několik metod, přičemž nejrozšířenější je chromatografie na obrácených fázích. HPLC používá pro mobilní fázi rozpouštědla a FPLC používá pro mobilní fázi solné pufry. FPLC používá několik purifikačních metod včetně iontové výměny, gelové filtrace a afinity, jakož i dalších méně používaných metod. Purifikace pomocí FPLC je obvykle vícestupňový proces zahrnující kombinaci metod.

Hlavy čerpadel HPLC jsou vyrobeny z nerezové oceli a schopnost průtoku obvykle nepřesahuje 10 ml/min, zatímco schopnost zpětného tlaku je obvykle 6000 psi a vyšší. Hlavy čerpadel FPLC jsou vyrobeny buď z titanu, nebo z materiálu PEEK a stolní čerpadla mohou dosahovat průtoků až 150 ml/min, ale zpětné tlaky při těchto vysokých průtocích jsou přibližně 725 psi. Průtoky u FPLC jsou obvykle vyšší než u HPLC, kde jsou zpětné tlaky obvykle nižší.

Různí se také kolony, stejně jako materiály kolon a velikosti částic. Kolony pro HPLC jsou vyrobeny z nerezové oceli. Kolony FPLC jsou vyrobeny buď ze skleněných těles s horní a spodní částí z vysoce výkonné pryskyřice, nebo z PEEK.

Většina pryskyřic pro HPLC je vyrobena z křemenných kuliček s malou velikostí částic, které snesou velmi vysoké protitlaky. Při FPLC se používá agaróza, polymerní materiály nebo křemičité materiály. Velikost částic pro FPLC je větší a mají velkou velikost pórů. Pryskyřice pro FPLC nejsou tak schopné snášet velmi vysoké protitlaky kvůli již zmíněným materiálům a velikostem.

HPLC obvykle používá v průtokové cestě nerezovou ocel. V průtokové cestě FPLC se nerezová ocel nepoužívá a je nahrazena titanem, PEEK a jinými vysoce výkonnými kompozity.

HPLC se používá k separaci sloučenin s malou molekulovou hmotností. FPLC se používá k purifikaci velkých biomolekul, jako jsou proteiny, nukleotidy a peptidy.

Mezi oběma technikami se liší také software. Chromatografický software HPLC řídí přístrojové vybavení a analyzuje data. Software FPLC řídí moduly a také integruje sběr přečištěných vzorků do sběrače frakcí. Kromě sledování UV absorpce sledují systémy FPLC také pH a vodivost.

Výkonnost HPLC i FPLC se od jejich zavedení zlepšila. V roce 1969 uvedla společnost Waters Corporation na trh první HPLC. První systém FPLC vyvinula společnost Pharmacia v roce 1982. Dnes nabízí řešení HPLC více společností než řešení FPLC.