Hemaglutinin

E. FHA

FHA je neobvykle velká a vysoce imunogenní molekula ve tvaru vlásenky, která byla zařazena jako primární složka do acelulárních vakcín proti pertusi . Je syntetizována jako 367-kDa prekurzor FhaB, který je modifikován na svém N-konci a štěpen na svém C-konci za vzniku zralého 220-kDa proteinu FHA. Ačkoli je účinně vylučován procesem vyžadujícím vnější membránový protein FhaC, zůstává značné množství FHA neznámým mechanismem spojeno s povrchem buňky . Studie in vitro s použitím různých typů savčích buněk naznačují, že FHA má nejméně čtyři různé vazebné aktivity, a byly navrženy čtyři samostatné vazebné domény FHA. Triplet Arg-Gly-Asp (RGD) , který se nachází uprostřed FHA a je lokalizován na jednom konci navrhované vlásenkové struktury, stimuluje adherenci k monocytům/makrofágům a pravděpodobně i k jiným leukocytům prostřednictvím LRI/IAP a CR3 . CR3-rozpoznávací doména v FHA dosud nebyla identifikována. FHA má také doménu rozpoznávající sacharidy (CRD), která zprostředkovává přichycení k řasinkovým buňkám respiračního epitelu i k makrofágům in vitro . Nakonec byla identifikována aktivita podobná lektinu pro heparin a jiné sulfátové sacharidy, která může zprostředkovat adherenci k neciliátním epiteliálním buněčným liniím . Toto místo pro vazbu heparinu je odlišné od míst CRD a RGD a je nutné pro hemaglutinaci zprostředkovanou FHA .

Důkazy pro fenotypy závislé na FHA in vivo bylo obtížnější získat. Na modelu králíka Saukkonen a kol. zjistili, že 24 hodin po intratracheální inokulaci je v plicích méně mutantů FHA než divokého typu B. pertussis . Na základě in vitro stanovených vazebných charakteristik různých mutantů použitých v jejich studii usoudili, že divoký typ B. pertussis přiléhá jak k řasinkovým epiteliálním buňkám, tak k makrofágům, a konkurenční experimenty s laktózou a anti-CR3 protilátkou naznačily, že se jedná o vazbu závislou na CRD i RGD . Pomocí myších modelů však jiní zjistili, že mutanti FHA se od divokého typu B. pertussis neliší schopností perzistovat v plicích, ale jsou defektní pro tracheální kolonizaci . Jiní, rovněž na myších modelech, nepozorovali žádný rozdíl mezi mutanty FHA a divokým typem B. pertussis. Obtížnost dosažení úplného a podrobného pochopení úlohy FHA v anatomické lokalizaci B. pertussis během infekce pravděpodobně odráží absenci přirozeného zvířecího hostitele (kromě člověka) a také složitost této molekuly a s ní spojených biologických aktivit.

Nedávno jsme zkoumali úlohu FHA v patogenezi tím, že jsme zkonstruovali dva typy mutantních derivátů FHA B. bronchiseptica: jeden obsahující in-frame deleci ve fhaB, strukturním genu FHA, a druhý, ve kterém je FHA exprimována ektopicky ve fázi Bvg- za nepřítomnosti řady faktorů virulence fáze Bvg+, s nimiž je normálně exprimována . Srovnání těchto mutantů s divokým typem B. bronchiseptica ukázalo, že FHA je nezbytný i dostačující pro zprostředkování adherence k epiteliálním buňkám plic potkana in vitro. Pomocí modelu infekce dýchacích cest u potkanů jsme prokázali, že FHA je naprosto nezbytná, ale nikoliv dostačující pro kolonizaci trachey u zdravých, neanestetizovaných zvířat. FHA však nebyla nutná pro počáteční kolonizaci trachey u anestetizovaných zvířat, což naznačuje, že její role při usazování může být věnována překonání clearance aktivity mukociliárního eskalátoru. Použití anestetizovaných potkanů rovněž odhalilo roli FHA při perzistenci. Nedávno bylo prokázáno, že B. pertussis inhibuje proliferaci T-buněk na exogenní antigeny in vitro způsobem závislým na FHA . Souhrnně tyto údaje naznačují, že FHA může plnit imunomodulační funkce i in vivo.

.