— FRAPcms

FRAP je metoda fluorescenční mikroskopie pro studium mobility fluorescenčně značených molekul v živých buňkách. Používá se k analýze difuze molekul v buňce, fluidity biomembrán a vazby proteinů.

Princip:

FRAP lze provádět pomocí moderního konfokálního mikroskopu. Vyžaduje fluorescenční značení molekuly zájmu, například pomocí protilátky značené GFP. Typický experiment FRAP zahrnuje tři různé fáze. Nejprve se měří počáteční fluorescence v oblasti zájmu. Poté se fluorescenční molekuly ve vybrané oblasti fotobílí. To se provádí zaostřením laserového paprsku na příslušnou oblast, což vede k intenzivnímu osvětlení a zhasnutí fluoroforů. V důsledku toho lze pozorovat tmavou oblast v jinak fluoreskujícím vzorku. Nakonec mohou fluorescenční molekuly z okolí difundovat skrz vzorek a vyměnit fotoblednoucí molekuly za neporušené. Tato obnova fluorescence se měří v čase.

Protože kinetiku obnovy může ovlivnit mnoho faktorů, je třeba experimenty FRAP dobře naplánovat a výsledná data pečlivě analyzovat. Pak je možné získat difuzní koeficient a parametry pohyblivosti molekul pomocí matematického modelování.