Characterization of a DNA-protein complex and capsomere subunits derived from polyoma virus by treatment with ethyleneglycol-bis-N,N‘-tetraoctovou kyselinou a dithiothreitolem

Ošetření polyoma virionů ethylenglykol-bil-N,N‘-tetraoctovou kyselinou (EGTA) a dithiothreitolem (DTT) při pH 8.5 vedlo k disociaci virionů na DNA-proteinový komplex a jednotlivé strukturní kapsomerové podjednotky. Hodnota sedimentace komplexu DNA-protein v sacharosových gradientech byla přibližně 48S a v rovnovážných gradientech CsCl měl hustotu 1,45 g/cm3. Alkalická sacharózová analýza DNA v tomto komplexu DNA-protein ukázala, že přibližně 75 % DNA tvoří složka 1. Proteiny spojené s DNA byly disociovány působením NaCl nebo aniontového detergentu Sarkosyl. VP1 a histonové proteiny VP 4–7 byly hlavními proteiny spojenými s DNA. Ošetření komplexu DNA-protein alkalickým pH vedlo ke specifickému odstranění FP1. Elektronová mikroskopie komplexu 48S DNA-protein ukázala, že se jedná o velmi pevně svinutou strukturu, která je o něco větší než intaktní virion. Ošetření komplexu buď NaCl, nebo pufrem o pH 10,5 vedlo ke ztrátě proteinu a následnému rozvolnění komplexu DNA-protein tak, že bylo možné DNA vizualizovat. Kapsomerové podjednotky uvolněné v důsledku ošetření EGTA-DTT sedimentovaly jako podjednotky 18S, 12S a 5S v sacharosových gradientech. Elektroforetická analýza izolovaných kapsomer ukázala, že VP1, VP2 a VP3 byly přítomny u každého druhu, ačkoli poměr proteinů se lišil. Kromě strukturních proteinů bylo zjištěno, že histony VP 4–7 jsou převážně spojeny s podjednotkou kapsomery 5S.