Collagenase A

Allgemeine Beschreibung

Collagenase ist eine Protease, die das dreifach-helikale Protein namens Kollagen spaltet. Clostridium histolyticum produziert sechs Arten von Kollagenasen, nämlich α, β, γ, δ, ε und λ. Diese Kollagenasen sind gegen Bindegewebe aktiv und zeigen mehr Reaktivität gegenüber Gelatine als gegenüber Kollagen. Die aus Clostridium histolyticum gewonnene Kollagenase hat eine sehr starke Aktivität, da sie das Kollagen von beiden Enden her verdaut, und zwar schon bei Temperaturen von 4-10 °C.

Spezifität

Kollagenase baut natives Kollagen ab. Clostripain, trypsinähnliche Enzyme und neutrale Proteasen bauen auch andere Proteine ab.
Enzymaktivität:
Collagenase-Aktivität: >0,15U/mg (nach Wünsch) (+25°C, 4-Phenyl-azobenzyl-oxycarbonyl-Pro-Leu-Gly-Pro-D-Arg als Substrat)
Abbauende Enzymaktivitäten: Trypsin, Clostripain und neutrale proteolytische Aktivität
Collagenase A hat ein ausgewogenes Verhältnis von Enzymaktivitäten.

Anwendung

Kollagenase aus C. histolyticum wird häufig zur Aufspaltung vieler Gewebearten (z.B. Lunge, Herz, Muskel, Knochen, Fettgewebe, Leber, Niere, Knorpel, Brustdrüse, Plazenta, Blutgefäße, Gehirn, Tumore, Nabelschnur) und zur Herstellung von Einzelzellsuspensionen für die Etablierung von primären Zellkultursystemen verwendet. Collagenase A wird empfohlen, wenn Ausbeute, Lebensfähigkeit und Funktionalität wichtig sind.
Clostridium Collagenase von Roche wurde zur Präparation von Zellen aus vielen Gewebearten verwendet, wie Hepatozyten, Adipozyten, Pankreasinseln, Epithelzellen, Muskelzellen, Endothelzellen usw. Die Eignung einer jeden Charge des Enzyms für den Aufschluss eines bestimmten Gewebes sollte jedoch empirisch ermittelt werden.

Einheit Definition

Inhalt
Lyophilisat, unsteril

Einheit Definition: Collagenase von Roche wird in Wünsch-Einheiten bestimmt (1 μmol gebildetes Produkt pro Minute bei +25 °C mit Wünsch-Substrat).
Häufig werden Collagenase-Aktivitäten in Mandl-Einheiten angegeben (1 μmol Leucin freigesetzt aus Collagen in 5 Stunden bei +37 °C).
Unglücklicherweise gibt es keinen einheitlichen Umrechnungsfaktor zwischen den beiden Aktivitätseinheiten, da die Mandl-Einheit zum Teil von der Konzentration kontaminierender Proteasen in der Kollagenasezubereitung abhängt, einer undefinierbaren Größe. Ein reineres Kollagenasepräparat würde tatsächlich eine niedrigere spezifische Aktivität in Mandl-Einheiten ergeben als ein Rohpräparat. Clostridium-Zubereitungen ergeben in der Regel Umrechnungsfaktoren von etwa 1:1800 (z. B. enthielt eine bestimmte Partie Clostridium-Kollagenase etwa 0,15 Wünsch U/mg und 250 Mandl U/mg).

Zubereitungshinweis

Aktivator: Ca2+
Inhibitoren:
Collagenase-Inhibitoren: EDTA, EGTA, Cys, His, DTT, 2-Mercapto-Ethanol
Collagenase wird durch Serum nicht gehemmt.
Clostripain-Inhibitoren: TLCK
Trypsininhibitoren: Aprotinin, Trypsininhibitor (Eiklar, Sojabohnen), Serum
Arbeitskonzentration: 0,5 bis 2,5 mg/ml
Lagerungsbedingungen (Arbeitslösung): -15 bis -25 °C
Roche empfiehlt, nur die für den sofortigen Gebrauch benötigte Menge an Lyophilisat zu rekonstituieren. Die rekonstituierte Lösung kann bis zu einer Woche bei -15 bis -25 °C gelagert werden. Wiederholtes Einfrieren und Auftauen ist zu vermeiden, da die Aktivität nach der Rekonstitution abnimmt.

Rekonstitution

Rekonstitution in jeder ausgewogenen Salzlösung (z. B. HBSS)

Sonstige Hinweise

Nur für die biowissenschaftliche Forschung. Nicht zur Verwendung in diagnostischen Verfahren.

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