Charakterisierung eines DNA-Proteinkomplexes und von Capsomer-Untereinheiten aus dem Polyoma-Virus durch Behandlung mit Ethylenglykol-bis-N,N‘-Tetraessigsäure und Dithiothreitol

Die Behandlung von Polyoma-Virionen mit Ethylenglykol-bis-N,N‘-tetraessigsäure (EGTA) und Dithiothreitol (DTT) bei pH 8.5 führte zur Dissoziation der Virionen in einen DNA-Protein-Komplex und einzelne strukturelle Kapsomer-Untereinheiten. Der Sedimentationswert des DNA-Protein-Komplexes in Saccharose-Gradienten betrug etwa 48S, und er hatte eine Dichte von 1,45 g/cm3 in Gleichgewichts-CsCl-Gradienten. Die alkalische Saccharose-Analyse der DNA in diesem DNA-Protein-Komplex zeigte, dass etwa 75 % der DNA aus der Komponente 1 bestehen. Die mit der DNA assoziierten Proteine wurden entweder durch Behandlung mit NaCl oder dem anionischen Detergens Sarkosyl dissoziiert. VP1 und die Histonproteine VP 4 bis 7 waren die wichtigsten mit der DNA assoziierten Proteine. Die Behandlung des DNA-Protein-Komplexes mit alkalischem pH-Wert führte zur spezifischen Entfernung von FP1. Die Elektronenmikroskopie des 48S-DNA-Proteinkomplexes zeigte, dass es sich um eine sehr eng gewickelte Struktur handelt, die etwas größer ist als das intakte Virion. Die Behandlung des Komplexes entweder mit NaCl oder mit pH 10,5-Puffer führte zum Verlust von Protein und zur anschließenden Auflockerung des DNA-Protein-Komplexes, so dass die DNA sichtbar gemacht werden konnte. Die infolge der EGTA-DTT-Behandlung freigesetzten Kapsomer-Untereinheiten sedimentierten als 18S-, 12S- und 5S-Untereinheiten in Saccharose-Gradienten. Die elektrophoretische Analyse der isolierten Capsomere zeigte, dass VP1, VP2 und VP3 in jeder Spezies vorhanden waren, obwohl die Verhältnisse der Proteine unterschiedlich waren. Zusätzlich zu den Strukturproteinen wurde festgestellt, dass die Histone VP 4 bis 7 vorwiegend mit der 5S-Kapsomer-Untereinheit assoziiert sind.